迄今为止，对于水产养殖动物的细菌性疾病，国内外的水产养殖业者选择的治疗患病水产养殖动物疾病的药物，依然是首先各种抗微生物药物兽药，将其添加再水产养殖动物的饲料中制备成药物饲料，通过投喂患病水产动物而进行及时有效的治疗的。

  抗微生物药物轻易造成细菌产生耐药性，当频繁使用抗微生物药物后，轻易造成危害水产养殖动物的致病性细菌，对抗微生物药物产生了耐药性。一旦致病性细菌对抗微生物药物产生了耐药性，也就失去了对致病性细菌的抗菌作用。

  因此，了解使用抗微生物药物在治疗水产养殖动物疾病过程中，致病性细菌对抗微生物药物产生耐药性的趋势与速率，对于制定抗微生物药物在治疗水产养殖动物疾病中的应用程序，是有很重要的显示意义的。

  本文是在对养殖黄颡鱼连续投喂5天拌有氟苯尼考的饲料后，从供试黄颡鱼的肠道中分离菌株，检测了用药前后黄颡鱼肠道中分离菌株对氟苯尼考耐药性变化的状况。旨在帮助水产养殖业者决定科学的用药程序，实现科学、精准、高效地使用水产用抗微生物兽药。

  摘要：为了探讨对养殖黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）投喂氟苯尼考后，肠道中可培养细菌对氟苯尼考耐药性的变化状况。实验方法是对平均体重（22.0±5.0）g的黄颡鱼，连续投喂含有15.0mg/kg.鱼体重氟苯尼考的颗粒饲料5d，采用药敏实验方法检验测试投喂药物饲料前、后，供试黄颡鱼肠道中细菌对氟苯尼考耐药性的变化状况。从实验组和对照组中各捞取5尾供试黄颡鱼，每尾黄颡鱼肠道中各分离3个菌株，分别对分离菌株进行氟苯尼考的药物敏感性检测，比较了用药前后分离菌株对氟苯尼考耐药性变化。根据结果得出，与未投喂药物的对照黄顙鱼相比，从投喂氟苯尼考的供试黄颡鱼消化道中分离菌株，对氟苯尼考的耐药性显著增加，氟苯尼考对不同分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）大约上升了4倍以上。

  迄今为止，对于人工养殖的黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）细菌性疾病，其实是依靠各种抗微生物药物进行及时有效的治疗。但是，抗微生物药物的频繁使用轻易造成致病微生物产生耐药性，而且各种微生物对不同抗微生物药物耐药性产生强弱与速率，可能因微生物的种类和抗微生物药物使用频率有关。了解抗微生物药物使用后养殖鱼类消化道中细菌耐药性的变化状况，对于将抗微生物药物作为水产用兽药时，制定科学用药程序是具备极其重大参考作用的。

  本研究将探讨了用添加15.0mg/kg.鱼体重氟苯尼考的颗粒饲料连续投喂黄颡鱼5 d后，检测了用药前后黄颡鱼消化道中分离菌株对氟苯尼考耐药性的变化状况。现将结果报告如下。

  本次实验中用于投喂黄颡鱼的氟苯尼考，是湖北回盛生物科技股份有限公司生产的10.0%水产用氟苯尼考粉（批号：20220609）。

  本实验中的黄颡鱼由湖北省武汉市新洲区汪集镇鱼苗繁殖场提供。选择健康、活泼无外伤的黄颡鱼作实验鱼。在每个塑料水族箱中饲养10尾平均体重为（22.0±5.0）g的黄颡鱼，每天投喂相当于鱼体重1.5%的人工配合饲料。驯养10 d，待供试黄颡鱼适应环境，并确认无疾病症状后，开始实验。实验期间水族箱中换水量约20.0%左右。实验期间饲养水体温度变化幅度为（21±3）℃。

  将氟苯尼考按15.0mg/kg.鱼体重的用药量，将药物首先均匀地拌和在熟化的淀粉糊（图1）中，再将其带有药物的淀粉糊均匀地拌合在颗粒饲料中制作成药物饲料（图3）。制备的药物饲料置于阴凉处30.0min以后，定量投喂实验组黄颡鱼；同时，以未添加药物的饲料投喂另一个水族箱的黄颡鱼，作为对照组。每天投喂1次药物饲料，连续投喂5d。

  在投喂药物饵料结束后的第2 d，从每个实验和对照网箱中各随机捞取5尾黄颡鱼，在无菌条件下，将供试鱼体用酒精消毒后解剖，从其肠道中采样并接种在铺有脑心浸液琼脂培养基（BHIA，Difco）的平皿中，从每尾鱼消化道中分离的细菌接种3个培养皿。将接种后的培养皿置于28℃恒温培养箱中培养48 h后，从每尾鱼肠道中分离菌株培养皿中，随机挑取3个菌落，从5尾供试黄颡鱼消化道分离15个菌株，对照组黄颡鱼消化道中也是分离纯化15个菌株。将分离纯化菌株分别转接在BHIA培养皿中，在28℃恒温培养箱中进行分离菌株的纯培养。培养48 h后，用灭菌生理盐水洗下培养皿中的菌落，并采用灭菌生理盐水将细菌浓度调节为106cfu/mL，备用。

  依日本化学疗法学会的办法来进行。首先将各种抗菌药物以适宜溶媒溶解后，再用灭菌生理盐水分别稀释至1000.0mg/L的浓度。然后在无菌条件下，用灭菌后的脑心浸液培养基（BHI，Difco）将药物稀释10倍，从而使培养基中药物的浓度达到100.0mg/L的浓度。再用定量移液枪向每支盛有2.9 mL BHI培养基的试管中加入2.9 mL含有药物的培养基，将试管在混悬器上混合均匀后，从中吸取2.9 mL含有药物的BHI培养基加到下一试管中，以此类推制作成药物浓度分别为100.0mg/L、50.0mg/L、25.0mg/L……0.05mg/L的2倍稀释药物系列培养基试管。最后，定量吸取0.1mL浓度约为1.0×106cfu/mL活菌液（比浊法测定）加入上述每支试管中，摇匀。置于28℃条件下培养72 h，经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）。

  对供试黄颡鱼投喂含有氟苯尼考的饲料后，在用药前后分别从供试黄颡鱼肠道中获得的分离菌株，对氟苯尼考MIC的变化测定结果如表1所示。由表1所示结果能够准确的看出，对供试黄颡鱼连续投喂含有氟苯尼考的药物饲料5d后，从供试黄颡鱼肠道中获得的分离菌株，对氟苯尼考的耐药性均不同程度地增强了。从投药实验组黄颡鱼肠道中获得的部分分离菌株，对氟苯尼考的耐药性较未投喂药物的对照组黄颡鱼肠道中获得的分离菌株增高了3~4倍。但是，也能够准确的看出不同菌株之间，对氟苯尼考的耐药性强度存在着较大的差异。

  从未投喂过氟苯尼考的对照组黄颡鱼肠道中分离的15个菌株，检测到不同分离菌株对

  氟苯尼考的MIC为0.78~3.13µg/mL之间，而对投喂苯尼考的黄颡鱼消化道中分离的15个菌株，不同菌株对氟苯尼考的MIC上升至3.13~12.5µg/mL。其MIC大约上升了4倍以上。

  已经有大量的研究结果证明，对水产养殖动物使用抗微生物药物与对其他动植物使用抗微生物药物一样，轻易造成致病性菌株产生耐药性。本实验中经过连续5d给黄颡鱼投喂氟苯尼考药物饵料后，从实验组黄颡鱼消化道中分离的菌株，已经对这种抗微生物药物的耐药性显著地增强。说明给黄颡鱼投喂氟苯尼考也时轻易造成消化道内的细菌产生耐药性的。

  细菌对不同抗微生物药物的耐药性产生速率也是不一样的，在本实验中所使用的氟苯尼考的投喂时间，是参照治疗水产养殖动物疾病时的用药程序决定的，连续投喂了5d时间，即导致黄颡鱼肠道中分离菌株对氟苯尼考产生了4倍以上的耐药性，说明黄颡鱼肠道细菌对氟苯尼考产生耐药性速率是比较迅速的。供试黄颡鱼肠道细菌对氟苯尼考产生耐药性速率如此迅速，可能有一个重要的缘由是在向供试黄颡鱼投喂氟苯尼考之前，并未对黄颡鱼肠道中细菌完成对氟苯尼考的药物敏感性检测的缘故，当用药量不能抑制或者杀灭黄颡鱼肠道中的细菌时，这些细菌就有机会对氟苯尼考产生耐药性了。

  需要说明的是，本实验中尚未对分离菌株做种属鉴定，而细菌对抗微生物药物的敏感性是与其种类相关的。实验与对照组中各种细菌种类的差异，以及因为种类差异导致的对药物敏感性测定结果的影响，尚要进一步研究。

  拟参会对象：政府、协会、特邀专家、会员单位、养殖大户、饲料企业、经销商、加工流通企业、电商企业、餐饮企业等代表约500人。